高效液相色谱法的操作演示

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mingtian17 发表于 2011/11/18 15:43:40 1036 查看 1 回复 [上一主题] [下一主题]

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高效液相色谱法的操作演示

近日，中国科学仪器博览会组委会针对国内食品检测仪的市场形式提前公布了GBT 22221-2008食品中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖的测定：高效液相色谱法，该方法将收录于2012年食品检验检测高新技术演示会《食品检验检疫实验室全程解决方案》，具体操作事项如下：

1范围

本标准规定了高效液相色谱法测定食品中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖。乳糖的条件和详细分析步骤。

本标准适用用于谷物类、乳制品、果蔬制品、蜂蜜、糖浆、饮料等食品中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖测定。

本标准果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖的最低检测限为0.4%

2范围性引用文件

下列文件中条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682-1992，neq ISO3695-1987）

3方法提要

试样经沉淀蛋白质和萃取脂肪后过滤，样液进高压也许是色谱仪，经氨基色谱柱分离，外标法定量

4试剂和溶液

除非另有说明，在分析中应使用分析纯试剂，水为GB-T6682规定的一级水。

4.1乙腈：色谱纯

4.2乙酸锌溶液：称取21.9g乙酸锌，加3ml冰乙酸，加水溶解并稀释至100ml.

4.4石油醚：沸程30-60℃。

4.5糖：纯度≥99%。

4.6糖标准贮备液：分别称取1g（精准至0.1mg）经过96℃±2℃干燥2h后的果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖标准品，加入约50g水溶解，称量（精准至0.1mg），溶液每克分别相当于20mg果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖，放置4℃密封可贮藏一个月。4.7糖标准工作液：分别准确吸取糖标准贮备液（4.6）1.00ml、2.00ml、3.00ml、5.00ml于10ml容量瓶，称量（精确至0.1mg），水至刻度线，称量（精确至0.1mg），分别相当于2.0mg/g、4.0mg/g、6.0mg/g、10.0mg/g浓度标准溶液。

5仪器和设备

实验室常规仪器设备和以下各项。

5.1高效液相色谱仪：具有示差折光检测器货相当的检测器。

5.2色谱柱：Vertex NH2氨基色谱柱（4.6mm×250mm，5um）。

5.3磁力搅拌器。

5.4离心机：4000r/min

1	STI 500型液相色谱仪仪器主要配置：
	P501高压输液泵系统，1台
	Shodex RI101示差检测器，1台
	日本原装进口VI-11手动进样阀，1套
	色谱柱温箱，1套
	手动进样阀支架，1个
	平头微量进样针 25ul/50ul，1支
	美国原装进口Vertex NH2 250mm*4.6mm/5um，1支
	不锈钢高抑流阻尼器，1套
	N2000色谱数据工作站软件，1套（液相专用版）/VI2010色谱工作站
	液相色谱仪维护工具包，1套
	不锈钢/PEEK 密封件，各4套
	液相专用大针筒，1支
2	初次购置液相色谱仪仪器可选配以下液相色谱仪前处理设备
	流动相过滤器（1000ML厚壁），1台
	袖珍式真空泵（-0.8KPA），1台
	超声波清洗器（2L），1台
	微孔滤膜（有机/水系各1包直径50*0.45um）
	针式过滤器（有机/水系各1包直径13*0.45um）

以上配置完全按照GBT 22221-2008国家标准执行

6试样的制备

6.1块状或颗粒状样品

取有代表性的样品至少200g，用于粉碎机粉碎，置于密闭的容器内。

6.2粉末状，糊状或液体样品

取有代表性的样品至少200g，充分混匀，置于密闭的容器内。

7分析步骤

7.1样品处理

7.1.1脂肪含量小于10%的食品

称取均匀的食品样品0.5g-10g（m1,精确至0.1mg），含糖量5%以下称取10g，含糖量5%-10%以下称取5g，含糖量10%-40%称取2g，含糖量40%以上称取0.5g，于150ml带有磁力搅拌子的烧杯中，加水约50g溶解，缓慢加入乙酸锌溶液（4.2）和亚铁qing化钾溶液（4.3）各5ml，再加水至溶液总质量约为100g(m2，精确至0.1mg)，磁力搅拌（5.3）30min，放置室温后，用于干燥滤纸过滤，取约2ml滤液用0.45um微孔滤膜过滤货离心获取清液至样品瓶，待色谱仪测定。

7.1.2糖浆、蜂蜜类

称取1g-2g均匀样品（m1，精确至0.1mg）于50ml容量瓶，加水至溶液总质量约为50g（m2，精确至0.1mg），充分摇匀，用0.45um微孔滤膜过滤货离心获取清液至样品瓶中，待色谱仪测定。

7.1.3含二氧化碳的饮料

吸取去除了二氧化碳的样品50ml（m1），至于100ml容量瓶中，缓慢加入乙酸锌溶液和亚铁qing化钾溶解5ml，放置室温后，用水定容至刻度（m2），摇匀，静置30min，然后用于干燥滤纸过滤，取约2ml滤液，用0.45um微孔滤膜过滤货离心获取清液至样品瓶中，待色谱仪测定。

7.1.4脂肪含量大于10%的食品

称取均匀的食品样品5g-10g（m1,精确至0.1mg），置于100ml具塞离心管中，加入50ml石油醚（4.4），振摇2min，1800r/min离心（5.4）15min,去除石油醚，重复以上步骤至去除大部分脂肪。蒸发残留石油醚，用玻璃棒讲样品捣碎，将样品移至150ml带有磁力搅拌子的烧杯中，用50g水分两次冲洗离心管，洗液并入烧杯，以下按7.1.1自“缓慢加入乙酸锌溶液和亚铁qing化钾溶解至5ml”依法操作。

7.2测定

7.2.1色谱参考条件

柱温40℃；

流动相，乙腈-水（85+15，体积比）；

流速：1.0ml/min；

进样体积：20ul。

7.2.2标准曲线的绘制

分别吸取20ul标准工作液（4.7）注入高效液相色谱仪，在上述色谱条件下测定标准溶液的响应值（峰面积），以浓度为横坐标/峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。

7.2.3样品中糖的测定

吸取20ul样液（7.1）注入高效液相色谱仪，在上述色谱条件下测定试样的响应值（峰面积）。由标准曲线上查得样液中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖的含量，或利用回归方程式计算样液中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖的含量。

8结果计算

样品中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖含量以质量分数x计，数值以%表示，按式（1）计算：x=c×m2/m1×1000×100 ……………………………… (1)

式中：

x-----样品中糖（果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖）含量，%；

c-----样液中糖的含量，单位为毫克每克（mg/g）；

m2---水溶液总质量，单位为克（g）或者毫升（ml）；

m1---样品的质量，单位为克（g）或者毫升（ml）。

平行测定结果用算术平均值表示，保留三位有效数字。

GBT 22221-2008

9允许差

用以样品独立进行测试获取的两次独立测试结果的绝对值不得超过算术平均值的10%。